Tip:
Highlight text to annotate it
X
Welkom op de Novus Visual Protocol Series.
In dit filmpje leer je hoe je alle fasen van fluorescerende uit te voeren
immunocytochemie met behulp van de meest voorkomende methoden voor deze test.
Voordat u begint met het ICC procedure,
zullen we laten zien hoe dekglaasjes en celkweek-platen voor te bereiden
gevolgd door het plateren van de cellen.
We beginnen met zuur behandelen van nieuwe dekglaasjes in een molaire van zoutzuur voor
24 uur.
Na een zorgvuldige decanteren uit het zuur en het verwijderen van het glas dekglaasjes,
wassen we elk met gedestilleerd water,
dan is een laatste spoeling met ethanol.
Als optionele stap kunt u plaatsen de dekglaasjes in een subbing rack onderdompelen
in een 0,1 mg / ml oplossing gelatine of polylysine
gedurende vijf minuten.
Deze coatings aide deze extra hechting van cellen aan de
coverslips zodat ze niet los in latere wasstappen.
Na de behandeling verwijdert u de substraatlaag rack en droog de dekglaasjes in de cultuur
kap of een hete oven.
Droge coverslips worden vervolgens in elk putje van een zes goed cultuur
plaat
en bedekt met een deksel.
Om tijd te besparen, kunnen grote hoeveelheden platen van tevoren worden voorbereid voor later gebruik.
De platen kunnen ook worden gesteriliseerd door ze onder UV-de motorkap is licht.
Met schone dekglaasjes bereid in zes well platen, kunnen we nu onze cellen.
Gevlochten hier in cellen voeg een dichtheid van een half miljoen cellen per well.
Cellen worden vervolgens gedurende de nacht gekweekt in de couveuse of tot het bereiken van de gewenste
dichtheid.