Tip:
Highlight text to annotate it
X
In de tijd van twee van onze ICC procedure voegen we onze secundair antilichaam, uit te voeren
een optionele dubbele etikettering en nucleaire etikettering stap,
monteren onze dekglaasjes om dia's, en het verkrijgen van beelden van onze antilichamen met
een fluorescentiemicroscoop.
Eerste
we aspireren uit primaire antilichamen oplossing volgende door het wassen van de cellen
driemaal met PBST gedurende vijf minuten.
Vervolgens bereiden floraform geconjugeerd secundair antilichaam die binden aan
het primaire antilichaam.
Verdun de secundaire blockingbuffer
bij de aanbevolen verdunning vermeld op de datasheet
en incubeer bij kamertemperatuur gedurende een uur.
Dekking van de platen met folie voorkomt sensitieve kleurstoffen uit vernederend.
Zuigen uit het secundaire antilichaam oplossing gevolgd door wassen van de cellen
driemaal met PBST
vijf minuten.
Als een optionele stap afzonderlijke primaire en secundaire paar kan worden gebruikt
een tweede epitoop visualiseren door een andere verdieping voor.
Daarnaast kunnen DNA-bindende kleurstoffen zoals DAPI worden toegepast zonder
secundaire antilichamen.
Raadpleeg de volledige schriftelijke Novus Protocol voor instructies over hoe te verdubbelen en
triple label.
Dekglaasjes zijn nu klaar om te worden gemonteerd op objectglaasjes.
Neem een schoon objectglas en breng een druppel antifade montage medium door langzaam
kiezen langs de zuiger van de pipet.
Verwijder voorzichtig een dekglaasje uit de put,
laat dan wassen te laten afdruipen
en plaats de cellen naar beneden op de dia.
Heldere nagellak kan worden gebruikt om het dekglaasje dichten en te voorkomen dat
uitdrogen.
Dia's kunnen nu zichtbaar worden onder een microscoop of bewaard bij -20
of 4 graden Celsius in een donkere glijbaan doos of dia boek.
Het beperken van de hoeveelheid tijd die elke dia wordt blootgesteld aan licht van de microscoop zal aide
het verlengen van de TL-signaal
en voorkomen foto bleken.