Tip:
Highlight text to annotate it
X
In fase vier boeken wij onze eerste verknoping eiwitten om DNA, gevolgd door
zuivering van het DNA. Begin met elke IP steekproef en de ingang steekproef
ging niet door de voorgaande IP stappen en voeg 8 microliter van 5 molair natrium
chloride de 200 microliter monsters gevolgd door vortexen.
Incubeer bij 95 graden Celsius gedurende 15 minuten. Elk monster te zuiveren gebruiken we een DNA bindende silica kolommen volgens
de fabrikant. Voeg eerst elk monster voor de juiste bedragen
DNA bindende buffer in vortex, en zet elk monster op een kolom aangebracht in een
verzamelbuis. Centrifugeer de kolommen bij 15.000 g gedurende 1 minuut.
Gooi de doorstroming uit de collectie buis en voeg DNA wasbuffer aan elke kolom.
Centrifugeer de kolommen bij 15000g gedurende een minuut. Gooi de stroom door de opvangbuis
en draai de lege kolommen bij 15000g gedurende twee minuten om ervoor te zorgen te zorgen dat ze volledig droog zijn.
Gooi de oude collectie buis en plaats de zuivering kolom in een nieuwe schone buis.
Voeg 50 microliter DNA afdwaling buffer direct aan het membraan in de kolom.
Laat om te zitten voor een minuut dan het uitvoeren van een eind-centrifugeren bij 15000g gedurende 1 minuut.
Gooi de zuivering kolom en sla het gezuiverde DNA bij -20 graden Celsius tot aan de laatste fase.